大腸桿菌O157核酸PCR檢測(cè)試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒；

 保存條件：避光 -20度 保存。

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大腸桿菌O157核酸PCR檢測(cè)試劑盒

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生物齋識(shí)認(rèn)cRNA純化、定量同檢測(cè)
1）cRNA純化
a.加60ul RNase-free Water到IVT反應(yīng)體系中，漩渦3 sec撈勻。
b.加350 ul IVT cRNA Binding Buffer到樣品中，漩渦3 sec撈勻。
c.加250ul無(wú)水乙醇到混合物中，移液器吹打充分撈勻。
d.將700 ul撈液轉(zhuǎn)移到IVT cRNA Cleanup Spin Column（置于2ml Collection Tube內(nèi)）中，大于等于8000 g離心15 sec，棄濾液同Collection Tube。
e.將Spin Column轉(zhuǎn)移到新嘅2 ml Collection Tube中，加五ul IVTcRNA Wash Buffer到Spin Column中，大于等于8000 g離心15 sec，棄濾液。
f.加五ul80%乙醇到Spin Column中，大于等于8000 g離心15 sec，棄濾液。
g.打開(kāi)Spin Column嘅理起，zui大轉(zhuǎn)速（小于等于25000 g）離心5 min，棄濾液同Collection Tube。
h.將Spin Column轉(zhuǎn)移到新嘅1.5 ml Collection Tube中，將11 ul RNase-free Water直接加到Spin Column嘅膜上，zui大速（小于等于25000 g）離心1 min打。
i.再加10ul RNase-free Water于Spin Column嘅膜上，zui大速（小于等于25000 g）離心1 min打。
j.進(jìn)行cRNA定量，如果唔即刻定量，就-70℃保存。
2）cRNA定量
a.按1:100倍稀釋?zhuān)?ul cRNA 198ul Nuclease-free Water，用紫之外，分光光度法測(cè)定cRNA嘅濃度與及A260/A280。
b.計(jì)算量測(cè)cRNA產(chǎn)量。
cRNA量測(cè)產(chǎn)量（ug）=cRNA濃度（ug/ul）X稀釋倍數(shù)X cRNA打體積
c.計(jì)算實(shí)際cRNA產(chǎn)量
實(shí)際cRNA產(chǎn)量=量測(cè)cRNA產(chǎn)量一齊始總RNA用量/用于體外轉(zhuǎn)錄cDNA嘅比例
3）電泳檢測(cè)
1.2%甲醛變性膠電泳檢測(cè)cRNApian段分布范圍。
3.生物齋識(shí)認(rèn)cRNA嘅pian段化同檢測(cè)
ビオチンマークcRNA純化、定量と測(cè)定
いち）cRNA純化
a .加60ul RNase-freeまで対象の空間IVT反応係の中で、渦3 sec混ぜる。
b .加350 ul IVT cRNA Binding Bufferサンプルでは、渦3 sec混ぜる。
c .加250ul無(wú)水エタノール混合物の中にまで、十分に混ぜて吹き付けるピペット。
d . 700 ul混合液に移っIVT cRNA Cleanup Spin Column（を2ml Collection  Tube內(nèi)）で、大なりイコール8000 g遠(yuǎn)心じゅうごsec、舎てるとCollection  Tube濾液。
e . Spin Column転送新しいにml Collection Tubeに加え、500 ul IVTcRNA  Wash Buffer SpinまでColumn中、大なりイコール8000 g遠(yuǎn)心じゅうごsec、捨てて濾液。
f .プラス500 ul80%エタノールSpinまでColumn中、大なりイコール8000 g遠(yuǎn)心じゅうごsec、捨てて濾液。
g .開(kāi)いSpin Columnの管をカバーし、zui大速度（小なりイコール25000 g）遠(yuǎn)心ごmin、捨て濾液とCollection Tube。
h . Spin Column移転の新しい1 . 5 ml Collection Tubeでは、じゅういちul  RNase-free対象の空間をSpin直接Columnの膜で、zui大速度（小なりイコール25000 g）遠(yuǎn)心いちmin溶離。
i .さらに10ul RNase-free対象の空間はSpin Columnの膜で、zui大速度（小なりイコール25000 g）遠(yuǎn)心いちmin溶離。
j . cRNA定量を行う場(chǎng)合、すぐ定量は、-ななじゅう℃保存。
に）cRNA定量
a .押しいち：ひゃく倍希釈、すなわち2ul cRNA 198ul Nuclease-free対象の空間、紫外分光光度法cRNA濃度測(cè)定やA260 / A280。
b .計(jì)算cRNA生産量測(cè)定。
cRNA測(cè)定量（ug）＝cRNA濃度（ug / ul）X希釈倍數(shù)X cRNA溶離體積
c .実際cRNA計(jì)算量
実際cRNA生産＝測(cè)定cRNA生産スタート総RNA用量/に體外転寫(xiě)cDNAの割合
3）電泳検出
ゲル電気泳動(dòng)検出ホルムアルデヒド変性1 . 2％cRNA斷pianの分布の範(fàn)囲。
さん.ビオチンマークcRNAの斷pian化及び検査